Comparación del método de secuenciación de las regiones HVI y HVII del ADN mitocondrial con el kit BigDye® Direct Cycle Sequencing y el kit BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing

Resumen

En el presente estudio se describen y comparan las características principales del método de secuenciación de las regiones HVI y HVII del ADN mitocondrial con el kit BigDye® Direct Cycle Sequencing y el kit BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing; mediante una revisión bibliográfica. La diferencia principal entre el kit BigDye® Direct Cycle Sequencing y el kit BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing, es que el primero requiere que los cebadores forward y reverse para PCR incluyan en sus extremos 5´ la cola M13; mientras que el kit BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing no la requiere. Además, la purificación de los productos de PCR y ciclo de secuenciación en el kit BigDye® Direct Cycle Sequencing se realizan en un solo paso, lo que reduce una potencial fuente de error por transferencias y el tiempo para el procesamiento de las muestras. Sin embargo, la ventaja del kit BigDye® Terminator v3.1 Cycle Sequencing es que permite re-analizar los productos de PCR de cada muestra ya que no utiliza el volumen completo de los mismos para realizar el ciclo de secuenciación como el kit BigDye® Direct Cycle Sequencing. Por lo anterior, el kit apropiado que puede ser aplicado en el Área de Genética del Laboratorio de Serología y Genética del Instituto Nacional de Ciencias Forenses de Guatemala (INACIF) es el kit BigDye® Direct Cycle Sequencing, al reducir el tiempo del flujo de trabajo del ciclo de secuenciación y minimizar la variabilidad experimental causada por múltiples pasos de manipulación de las muestras.